核酸试剂选品指南

1、提取试剂：包括了各种提取DNA的常用试剂,和纯化DNA所用的试剂；

2、PCR扩增试剂：主要是taq酶，dntp，缓冲试剂，引物；

3、产物检测试剂：琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶、aps、tmed、eb等等。

PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链。

PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。

1、PCR实验一定要保管好试剂，防止交叉污染，尤其是交叉使用，极易引起污染。

2、NA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。

3、超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品，移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。

4、PCR操作应戴手套并勤于更换。

5、成套试剂，小量分装，专—保存，防止它用。配制试剂用新器具，用后作一次性处理。

6、试剂管用前先瞬时离心，使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。

7、引物稀释时，要首先瞬时离心，以避免粉末状引物在开盖时弹出管外。

1、试剂准备阶段：

试剂准备是PCR操作的第一个流程，需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。

所有的PCR体系都应该在-20C保存，除了ddH 20之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。

配制反应体系应在快速进行，以减少非特异性扩增。

体系配制完成之后应马上进行PCR反应。

2、样本制备阶段：

样本制备是整个PCR反应中最为关键的环节，在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。

严格遵守操作规程进行加样操作，操作时候尽量少说话或者不说话。

所有操作需要在生物安全柜内进行，操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒，注意生物安全柜中物品的排放。

3、核酸扩增：

在核酸扩增环节需要选择质量好的EP管，装入反应体系的EP管上机前混匀、离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。

在样本检测的同时设立对照。

同时严密检测PCR扩增仪的各项性能指标，其中对PCR扩增仪而言温度控制就意味着质量。

一般试剂盒主要是针对酶分类，其次是分为简易操作混合体系和分开单独体系。

先说酶，你的基因如果是小于2K，那么普通的高保真酶就可以满足。

如果是长片段就选择各公司针对长片段设计的酶。如果不需要对序列保真度要求很高，只需要鉴定一下，那么普通的taq酶就够了。

针对体系问题，如果你的基因有文献参考成熟的体系，那么一般就定混合体系那种premix的就可以，如果对Mg离子等有特殊要求，就选择分开自己配体系那种。